關于PCR擴增試劑盒您了解多少？

　　PCR擴增試劑盒在血樣DNA中的檢驗及對比結果。方法抽取320例血樣DNA作為檢測對象，并應用不同PCR擴增試劑盒進行檢測，在此基礎上，結合所得的血樣檢驗結果進行分析比較。結果經(jīng)研究，在樣本相同的情況下，血樣檢驗差異率為1.25%(4/320)。而且經(jīng)檢測，4例出現(xiàn)不同檢驗分型的樣本均存在等位基因缺失。另外，Profiler PlusTM擴增不平衡發(fā)生率為0.9375%，IdentifilerTM擴增不平衡發(fā)生率為0.3125%，Powerplex16HS擴增不平衡發(fā)生率為0.3125%。結論在血樣DNA的檢驗過程中，通過應用不同PCR擴增試劑盒進行檢測，能夠準確獲取到不同位置的異常基因，減少基因缺失、擴增不平衡所帶來的誤差影響，具有較高的推廣價值。
 

　　PCR擴增試劑盒注意事項：
 

　　1.Pfu擴增效率通常比Taq酶差，這是由于Pfu具有3'-5的外切酶活性(高保真性)所引起的，不是由于Pfu酶的質(zhì)量不穩(wěn)定所致。Pfu擴增1.5kb以下的DNA片段和Taq沒有多大差別。
 

　　2.10xPfu PCR Buffer中已含有Mg+，用該緩沖能保證擴增產(chǎn)物的保真性。提高反應體系的pH和Mgt濃度能部分提高DNA擴增的產(chǎn)率，但產(chǎn)物的保真性將有所下降。
 

　　3.用Pfu擴增時，引物的純度要求較高，長度要求大于18bp，Tm在55-80℃之間。引物的濃度在0.1-0.5uM之間，比Taq略高。Pfu具有33-5的外切酶活性可能會降解引物，特別是溶液中沒有dNTP的情況下。所以，Pfu必須是最后加入到反應體系中，并立即進行PCR反應。
 

　　4.Pfu的熱穩(wěn)定性比Taq酶高，對于GC含量很高的模板，變性溫度可以提高到98℃，而不會影響Pfu的活性。
 

　　5.PCR產(chǎn)物為平端，不能直接用T/A克隆方式克隆。需要加A后才能進行克隆。