蛇形毛圓線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒

儲存條件：

14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，產(chǎn)品僅用于科研在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

蛇形毛圓線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。產(chǎn)品僅用于科研
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

應(yīng)用案例：
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）。產(chǎn)品僅用于科研
稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
2.標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20  μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9.在 PCR 管中加入下列成分。產(chǎn)品僅用于科研
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
探針法：
aqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴增相關(guān)。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端，而淬滅劑則在3’ 末端。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對時，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離。隨著擴增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性。
以下是公司正在銷售的產(chǎn)品：

phospho-CBL2(Tyr731)  酸化原癌蛋白CBL2抗體沙葡萄糖肉湯Sabouraud Dextrose Broth

phospho-Caveolin-2(Tyr19)  酸化細(xì)胞質(zhì)膜微囊蛋白-2抗體結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂Violet Red Bile Glucose Agar

Phospho-Caveolin-1 (Tyr14)  酸化細(xì)胞質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂含葡萄糖和乳糖Violet Red Bile Agar with Glucose and Lactose

Phospho-Caspase-9 (Tyr153)  酸化半胱氨酸蛋白酶9抗體腸道菌增菌肉湯EE 肉湯Enterobacteria Enrichment Broth Mossel

Phospho-Caspase-9 (Thr125)  酸化半胱氨酸蛋白酶9抗體甘露醇化鈉瓊脂Mannitol Salt Agar

Phospho-Caspase-9 (Ser196)  酸化半胱氨酸蛋白酶9抗體兔血漿檸檬酸鈉Rabbit Plasma

蛇形毛圓線蟲探針法熒光定量PCR檢測試劑盒phospho-Caspase 6 (Ser257)  酸化半胱胺酸蛋白酶蛋白6抗體連四硫酸鹽肉湯培養(yǎng)基基礎(chǔ)Fluid Tetrathionate Medium Base

phospho-CASC3(Tyr181)  酸化腫瘤易感候選基因3抗體碘溶液

Phospho-Cas (Tyr165)  酸化細(xì)胞凋亡敏感性基因0.1%煌綠溶液

phospho-CARM1(Ser228)  酸化蛋白精氨酸N基4抗體亮綠瓊脂培養(yǎng)基Brilliant Green-Agar Medium

phospho-cardiac Troponin I(Thr143)  酸化心肌肌鈣蛋白抗體木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂Xylose lysine Desoxycholate Agar

Phospho-CaMKII (Thr286)  酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體HE 瓊脂培養(yǎng)基Hektoen Enteric Agar Medium

phospho-CAMK4(Thr196 + Thr200)  酸化鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶4抗體三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基Triple Sugar-Iron-Agar Medium

phospho-CAMK2G (Ter286)  酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶CAMK2G抗體麥康凱瓊脂MacConkey Agar

phospho-CaMK2 alpha (Tyr231)  酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體麥康凱肉湯MacConkey Broth谷胱甘肽瓊脂糖Glutathione Agarose4℃保存，切勿冷凍2mL

谷胱甘肽還原酶檢測試盒Oxidative Stress Detection Kit常溫保存100次

谷胱甘肽過氧化物酶檢測試盒Oxidative Stress Detection Kit常溫保存100次

谷胱甘肽S 轉(zhuǎn)移酶GST(Glutathione S-Transferase)-20℃保存1mg

谷氨酰胺測試盒Oxidative Stress Detection Kit常溫保存48 T

谷氨酸脫酶GLDH  -20℃保存3000U

古細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 1（rDNA）Bacterial DNA Barcoding PCR Mix-20℃保存100次

古細(xì)菌+真細(xì)菌種屬鑒定 PCR Mix 3（rDNA）Bacterial DNA Barcoding PCR Mix-20℃保存100次

古典豬瘟病PCR檢測試盒低溫運輸，-20℃保存50T

鉤狀螺旋體PCR檢測試盒 低溫運輸，-20℃保存50T